Análisis de la capacidad antimicrobiana e inmunomoduladora de polifenoles glicosilados de especies vegetales mediterráneas: actividad in vitro e in vivo. Aplicaciones en alimentación funcional.

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Descripción: Estudios previos del grupo solicitante han revelado que extractos complejos (hoja de olivo) poseen una mayor capacidad antimicrobiana (frente al virus VHSV) que su compuesto mayoritario, la oleuropeina (1,2), pudiendo ser otros compuestos minoritarios los responsables de esta actividad sinérgica. La oleuropeina (3) y otros polifenoles glicosilados (barbaloina (4)) han demostrado afectar significativamente a fosfolípidos negativos de membrana hecho que puede tener relación con su actividad antimicrobiana. Además, otros compuestos del olivo han demostrado capacidad inmunomoduladora (verbascosido (5-8), ac. Maslínico (9), apigenina (10)), lo que puede estar relacionado con la capacidad antimicrobiana del extracto. Partiendo de estos hechos, se abordará el estudio de la capacidad antimicrobiana y/o inmunomoduladora de estos extractos/compuestos a diversos niveles para profundizar en el mecanismo molecular de su actividad biológica y así posibilitar su utilización como ingredientes funcionales para alimentación animal y humana. Primero, se realizarán ensayos in vitro en membranas modelo para estudiar la interacción de estos compuestos con fosfolípidos utilizando diversas técnicas biofísicas. Además se estudiará el efecto de estas moléculas sobre la glicoproteína G (de membrana) del virus VHSV. Esto permitirá determinar la interacción molecular entre los compuestos y componentes de membrana e intentar correlacionarlo con su actividad biológica para así contribuir al conocimiento de su mecanismo molecular. Por otra parte, se determinará mediante cultivo celular la capacidad antiviral de estos compuestos en combinaciones binarias y en forma aislada frente al virus VHSV para tratar de encontrar los compuestos responsables del efecto sinérgico observado previamente por el grupo de investigación y así maximizar la capacidad antimicrobiana del extracto de hoja de olivo. También se determinará la capacidad bactericida de compuestos/extracto (E. coli, S. aureus) y se utilizarán membranas sintéticas compuestas por fosfolípidos sintéticos o lípidos de E. coli en ensayos de liberación de contenidos. Fenilpropanoides glicosilados del olivo (verbascosido) han demostrado poseer capacidad antioxidante, antiinflamatoria e inmunomoduladora en modelos in vitro y ex vivo (8). Por tanto, se estudiarán estas actividades en compuestos y extractos que los contengan (hoja de olivo, hierba luisa) con varios modelos: un modelo de oxidación in vitro de glicosaminoglicanos formadores de cartílago (sulfato de condroitina) y un modelo de oxidación celular, condrocitos articulares humanos, para demostrar si esta capacidad antioxidante pudiera estar en relación con su capacidad antiinflamatoria. Por último, se realizarán pruebas in vivo en peces (alevines de trucha arcoris) para determinar la capacidad inmunomoduladora de compuestos/extractos a través de la determinación de citoquinas pro- y antiinflamatorias a través de la determinación de su mRNA por RT-PCR. Además, este estudio se hará extensivo a mamíferos mediante el test del edema plantar en ratones y se determinarán parámetros de inflamación así como citocinas pro y antiinflamatorias. Los extractos vegetales serán proporcionados por dos empresas interesadas en los resultados del proyecto (EPO) y con las que el grupo de investigación tiene una relación estable. Algunos extractos comerciales serán optimizados en laboratorio o planta piloto para maximizar su actividad si fuera necesario.

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