Bases moleculares para el diagnostico y control de las cepas virulentas del virus de la tristeza de los cítricos (CTV)

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Descripción: La epidemia de tristeza (Citrus Tristeza Virus, CTV) ha producido en España el decaimiento y muerte de ~50 millones de árboles injertados sobre naranjo amargo, y ha obligado a reconvertir la citricultura hacia el uso de patrones tolerantes al decaimiento pero de peores cualidades agronómicas que el naranjo amargo. Esta medida será insuficiente en el futuro para controlar las cepas virulentas de CTV causantes de daños en variedades comerciales con independencia del patrón, cuya incidencia parece aumentar. El control de estas cepas implica evitar su propagación en viveros (o campo) o implementar la protección cruzada con cepas asintomaticás del virus, medidas que requieren métodos rápidos y fiables que discriminen ambos tipos de cepas. Para ello, es necesario 1) delimitar previamente los motivos de secuencia de CTV responsables de la inducción de los distintos síndromes, 2) implementar métodos adecuados para discriminar las variantes virulentas y no virulentas en la población viral y 3) conocer las interacciones CTV/huésped para poder manipularlas en el futuro y evitar los daños inducidos por el virus en cítricos. Para abordar el primer objetivo hay que utilizar un sistema genético eficiente de CTV, basado en clones infecciosos, que permita manipular su genoma y examinar los efectos de estos cambios en la expresión de síntomas. En nuestro equipo se ha desarrollado un nuevo sistema genético basado en la agroinfección sistémica de N. Benthamiana con vectores binarios portadores del genotipo CTV-t36 (Florida), que produce suficientes viriones infecciosos para inocular mecánicamente cítricos y observar los síntomas. Sin embargo, es necesario universalizar este sistema (funcional solo con t36) para utilizarlo con aislados españoles de características patogénicas diferentes a t36 y así analizar los distintos determinantes de patogenicidad virales. En este proyecto se pretende: I) optimizar el sistema genético desarrollado para ctv-t36 en N. Benthamiana, II) adaptarlo al menos a un genotipo virulento español previamente secuenciado, obteniendo clones infecciosos o minireplicones de este, y III) sintetizar clones híbridos en los que se sustituyan regiones génicas homologas entre aislados virulentos y no virulentos y ensayar su efecto en la inducción de síntomas en cítricos. Además, se analizaran posibles cambios en la población del virus en su paso por N. Benthamiana, un huésped no natural de CTV, que podría afectar su patogenicidad en cítricos. Con respecto al segundo objetivo, recientemente hemos desarrollado un método sensible que discrimina y cuantifica las cepas virulentas/no virulentas de la tristeza. En este proyecto se pretende: I) validar esta técnica con un amplio panel de aislados de CTV de colecciones internacionales y de campo, ll) ensayarla en experimentos de protección cruzada que están en curso, y III) si se identifica algún determinante genético de CTV implicado en la inducción de síntomas severos como los de acanaladuras en la madera de naranjo dulce y pomelo, implementar un nuevo método de discriminación de cepas virulentas. Finalmente, se abordará un novedoso estudio de las interacciones básicas CTV/huésped en el sistema experimental de N. Benthamiana (u otro sistema sencillo) para extrapolarlas posteriormente a cítricos. Este conocimiento será necesario en el futuro para poder modificar estas interacciones y hacerlas menos dañinas para el huésped, y en el caso del naranjo amargo podría permitir su recuperación como patrón.

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